Pesquisa

Amplificação gênica


Última modificação: 22/02/2019 | 11h51

A PCR digital em gotas (ddPCR) pertence à terceira geração de tecnologia de Reação em Cadeia da Polimerase que, ao combinar o estado da arte da tecnologia microfluídica com a química de sondas TaqMan®, permite a quantificação absoluta (sem necessidade de curva-padrão) de ácidos nucleicos de interesse, com altos níveis de sensibilidade e especificidade. Dentre suas principais aplicações estão: biópsia líquida (ex. DNA tumoral circulante); detecção de sequências raras; detecção de alvos-moleculares em amostras com DNA de baixa qualidade e/ou com muitos inibidores de PCR (ex. amostras fixadas e emblocadas em parafina); análise de variação do número de cópias (CNV) e de variantes alélicas (SNPs); análise de expressão gênica (mRNA, microRNA); análise do perfil de metilação; validação de biblioteca de NGS (next generation sequencing); quantificação de DNA residual para controle de qualidade de produtos biotecnológicos (ex. vacinas); detecção de agentes infecciosos. O INCA disponibiliza as plataformas de ddPCR (QX100®) e de PCR em Tempo Real (ViiA7® e 7500 FAST®), assim como treinamento técnico-científico e consultoria na área de PCR digital.

 

Responsável pela plataforma:

Leandro de Souza Thiago (Lattes)
Tecnologista
Email: lthiago@inca.gov.br
Telefone: +55 21 32076573

 

Lista de equipamentos:

O sistema ddPCR QX100 consiste de quatro equipamentos: 
1.    Gerador de gotas - para particionamento da reação pré-PCR em emulsão do tipo água-em-óleo. 
2.    Seladora de placa - para evitar a evaporação durante os ciclos de amplificação no termociclador.
3.    Leitor de gotas - para leitura de fluorescência. O QX100® é equipado para ler FAM e HEX (ou VIC). Este equipamento não é capaz de ler EvaGreen.
4.    Notebook - visualização, análise e interpretação dos dados. 

A plataforma conta ainda com Termociclador Veriti® (essencial para a etapa de amplificação da PCR digital), e PCR em Tempo-Real (ViiA7® e 7500 FAST®).

 

Utilização:

Todos os equipamentos devem ser agendados com o responsável . Os equipamentos estão disponíveis 24 horas por dia, todos os dias da semana, para usuários com experiência ou de segunda a sexta, para usuários iniciantes. No momento, a unidade não disponibiliza reagentes nem insumos para nenhum dos equipamentos. O usuário deve trazer todo o material necessário. Usuários sem experiência em ddPCR receberão treinamento técnico-científico até se tornarem independentes. Usuários treinados poderão utilizar a plataforma sem supervisão. Sempre que desejarem, todos os usuários poderão solicitar consultoria científica para desenho de ensaios, análise e interpretação de resultados de PCR digital. Todos os artigos científicos publicados, assim como quaisquer outras produções intelectuais (apresentações em seminários e congressos, resumos em anais, etc), deverão referenciar, em materiais e métodos ou agradecimentos, ao INCA pelo uso dos equipamentos e/ou suporte técnico, quando for o caso.
 

Localização:

Instituto Nacional de Câncer
Coordenação de Pesquisa
Rua André Cavalcanti, 37, 3º andar
Centro, Rio de Janeiro
CEP: 20231-050

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